TECHNO CHEMICAL corp.

Flow Cytometry

Bangs Laboratories, Inc.（バングス社）のフローサイトメトリー用標準粒子

General Fluorescence Reference Products

フローサイトメトリーでは、信頼性の高い結果を達成し、意味のあるデータを生成するために、一貫した機器のセットアップと標準化が不可欠です。 セットアップと標準化のための当社のマイクロスフェアベースのツールは、フローサイトメトリー プログラムをサポートし、さまざまな機器、研究所、および経時的なデータを比較するためのフレームワークを確立する上で重要な役割を果たします。

Multi-Color Fluorescence Reference Standard

Full Spectrum™ Multi-Color Fluorescence Reference Standard は、可視スペクトルで蛍光を発する非常に均一なマイクロビーズで、日々の最初のQC または機器セットアップの基準位置を提供します。

QC プログラムの一環として、フルオロフォアで標識されたマイクロスフェアは、一般的な機器の状態をチェックし、経時的な安定性を監視するための便利な手段を提供します。 ビーズの計測が実行されると、関連する蛍光検出器のチャネル値が記録され、異常値と傾向を特定するためにデータが監視されます。 このタイプのチェックは、光学および流体システムの問題 (レーザー出力の低下、障害物/漏れなど)、および温度、湿度、振動などの環境要因が機器の性能に及ぼす影響をユーザーに警告することができます。 機器セットアップのツールとして、各検出器の基準ピークを配置して、機器の初期設定を行うことができます。

Quantum™ QC

Quantum™ QC は、特定のピークをターゲット チャネル値に配置することにより、すべての検出器の分析ウィンドウを設定するために使用できる 8 ピークのマルチ強度、マルチ蛍光標準です。

論文:
Purvis N, Stelzer G. (1998) Multi-platform, multi-site instrumentation and reagent standardization. Cytometry; 33(2):156-65.

Ultra Rainbow Fluorescent Particles

Ultra Rainbow Fluorescent Particles (Spherotech™ 製) は複数の蛍光体で内部標識されており、365 ～ 650 nm の任意の波長で励起できます。 Ultra Rainbow Fluorescent Particles は、3 ～ 9 色の機器の一般的な QC 目的で使用できます。 Ultra Rainbow Fluorescent Particles は、A (20 テスト)、B (100 テスト)、および C (280 テスト) の 3 つの量で利用できます。

Fluorescence Reference Standards

フローサイトメトリー用の単色蛍光参照標準は、細胞の標識に使用されるものと同じ一般的な蛍光体で標識されています。 これらは、光学系の特定のパスの QC に使用したり、特定のテスト (免疫表現型検査、細胞生存率、細胞周期など) 用にフィルター セットを最適化したり、一般的な補正または強度標準として使用したりできます。 フローサイトメトリー用蛍光色素のリファレンス チャートをご覧ください。

論文

1. Cretich, M., Di Carlo, G., Giudici, C., Pokoj, S., Lauer, I., Scheurer, S., & Chiari, M. (2009). Detection of allergen specific immunoglobulins by microarrays coupled to microfluidics. Proteomics, 9(8), 2098-2107.(Propidium Iodide FRS)

2. Franklin, RB, Campbell, AH, Higgins, CB, Barker, MK, & Brown, BL (2011). Enumerating bacterial cells on bioadhesive coated slides. Journal of microbiological methods, 87(2), 154-160.(Cat. 892, Propidium Iodide FRS)

Unified Fluorescence Intensity Range Products

Right Reference Standard™

各標準は、高強度レベルで単一の蛍光色素で標識されたマイクロスフェア表面の集団で構成されています。 Right Reference Standard™ マイクロスフェアは、ヒトリンパ球のサイズに近似しています (～7-9µm)。 蛍光 CV が狭いため、Right Reference Standard™ 製品はアライメント目的に適しています。 これらの標準は、光学システム (レーザー/フィルター/PMT) の特定のパスを 管理したり、特定の検出器の統一された蛍光範囲を確立するためにも使用できます。

Compensation Products

Simply Cellular^® Compensation Standard

Simply Cellular^® Compensation Standard には、直径約 7 ～ 9 μm の低抗体結合および高抗体結合ビーズの混合集団が含まれています。ユーザーは、目的の蛍光抗体結合を一定分量標識し、特定の分析に適した補正設定を確立します。

FITC/PE Compensation Standard

FITC / PE Compensation Standard には、直径が ~7 ～ 9 µm の 4 つのマイクロスフェア集団が含まれています。Autofluor™ 集団、および FITC、PE、および FITC / PE で表面標識された単一集団です。 Autofluor™ 集団は、染色されていない休止リンパ球の自己蛍光に近づけるために、低レベルの蛍光体で染色されています。 このキットは、FITC および PE 蛍光色素を使用した分析の象限境界および補正設定を確立するのに役立ちます。

Viability Dye Compensation Standard

Viability Dye Compensation Standards は、LIVE/DEAD^® 染色またはその他のアミン反応性色素で標識して、フローサイトメトリー分析用の補正標準を生成するのに適しています。 ビーズは、ヨウ化プロピジウム、DAPI、または SYTOX^® などの DNA 染色剤での標識には適していません。特定の色素または染色剤の適合性について不明な場合は、お問合せ下さい。

論文

1. Perfetto SP, Chattopadhyay PK, Lamoreaux L, Nguyen R, Ambrozak D, Koup RA, Roederer M. (2006). Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry. J Immunol Methods; 313(1-2):199-208.

2. Perfetto SP, Chattopadhyay PK, Lamoreaux L, Nguyen R, Amrozak D, Koup RA, Roederer M. (2010) Amine-reactive dyes for dead cell discrimination in fixed samples. Curr Protoco Cytom; Jul; CHAPTER: Unit-9.34. (SIMPLX Amine active beads [Cat. 450, 451]).,

3. Lamoreaux, L, Roederer, M, Koup, R (2006) Intracellular cytokine optimization and standard operating procedure. Nat. Protocols 1, 1507-1516. (Amine-modified microspheres, PAO5N [Cat. 450, 451]).

4. Lugli E, Gattinoni L, Roberto A, Mavilio D, Price DA, Restifo NR, Roederer M. (2012) Identification, isolation and in vitro expansion of human and nonhuman primate T stem cell memory cells. Nature Protocol v8(1). (SMPLX R-NH2 Beads [Cat. 450, 451], stained for LIVE/DEAD Aqua Comp Beads)

5. Estes, M. L., Mund, J. A., Ingram, D. A., & Case, J. (2010). Identification of endothelial cells and progenitor cell subsets in human peripheral blood. Current protocols in cytometry, 9-33.(Cat. 450, 451 Viability Dye Compensation Standard [Amine Polymer Microspheres, PA04N] [Cat. 450, 451]).

Flow Cytometry Antibody Binding Beads

単一集団のプロテイン A またはプロテイン G マイクロスフェアは、さまざまなホスト由来の結合抗体による標識に適しています。標識されたミクロスフェアは、単一集団の標準品として、または補正目的で標識されていない集団と組み合わせて使用できます。

論文

Musil, J, Kutinova, L, Zurkova, K, Hainz, P, Babiarova, K, Krystofova, J, & Nemeckova, S. (2014) Antitumor activity and immunogenicity of recombinant vaccinia virus expressing HPV 16 E7 protein SigE7LAMP is enhanced by high-level coexpression of IGFBP-3. Cancer gene therapy, 21(3), 115.

Quantitation/Calibration Products

バングス社の Quantum™ MESF および Quantum™ Simply Cellular^® ビーズは、サイトメーターやソフトウェアに関係なく蛍光強度単位の標準化を可能にする外部標準です。 それらは細胞の標識に使用されるのと同じ蛍光色素で標識されているため、環境に対して同期応答を提供します。 使用するには、ビーズをサンプルと同じ日に、同じ PMT および補正設定で実行し、機器のチャネル値と標準化された蛍光強度単位 (MESF または ABC) を関連付ける検量線を確立します。 次に、細胞サンプルを曲線に対して読み取り、発現を決定します（すなわち、各細胞集団からの蛍光シグナルの定量化です）。

Quantum™ MESF

バングス社の Quantum™ MESF キットには、1 つのブランク集団と、様々な量の Alexa Fluor^® 488、Alexa Fluor^® 647、APC、または R-PE で標識された一連の 4 つの蛍光マイクロスフェア集団、あるいは、様々な量の FITC で標識された 5 つの蛍光ミクロスフェア集団が含まれています。
Molecules of Soluble Fluorochrome (MESF) 単位での蛍光強度の割り当ては、純粋な蛍光色素の溶液からの蛍光測定値と同じ蛍光色素で表面標識されたマイクロスフェアからの蛍光測定値を直接比較することによって実行されます。 実効 FP 比を決定するには、PDS 849 を参照してください。 各キットには無料の QuickCal^® 分析テンプレートが付属しており、細胞の発現レベルの測定や、機器の直線性と検出閾値の評価に役立ちます。 Quantum™ MESF キットには、A (20 テスト)、B (100 テスト)、および C (280 テスト) の 3 つのサイズがあります。

論文

1. Wyant T, Lackey A, Green M. (2008) Validation of a flow cytometry based chemokine internalization assay for use in evaluating the pharmacodynamic response to a receptor agonist. J Transl Med; 6:76.

2. Quadrini KJ, Hegelund AC, Cortes KE, Xue C, Kennelly SM, Ji H, Hogerkorp C-M, Mc Closky TW. (2016) Validation of a flow cytometry-based assay to assess C5aR receptor occupancy on neutrophils and monocytes for use in drug development. Cytometry B Clin Cytom; 90B:177-190.

3. Bray RA. (2013) Lymphocyte crossmatching by flow cytometry. Methods Mol Biol; 1034:285-96.

4. Smith ML, Chyla B, McKeegan E, Tahir SK (2016) Development of a flow cytometric method for quantification of BCL-2 family members in chronic lymphocytic leukemia and correlation with sensitivity to BCL-2 family inhibitors. Cytometry B Clin Cytom

5. Kay S, Herishanu Y, Pick M, Rogowski, O, Baron S, Naparstek E, Polliack A, Deutsch, V. R. (2006) Quantitative flow cytometry of ZAP-70 levels in chronic lymphocytic leukemia using molecules of equivalent soluble fluorochrome. Cytometry, 70B: 218-226.

6. Muller L, Mitsuhashi M, Simms P, Gooding WE, Whiteside TL (2016) Tumor-derived exosomes regulate expression of immune function-related genes in human T cell subsets. Sci Rep 6:20254.

7. Singh H, Figliola MJ, Dawson MJ, Olivares S, Zhang L, et al. (2013) Manufacture of Clinical-Grade CD19-Specific T Cells Stably Expressing Chimeric Antigen Receptor Using Sleeping Beauty System and Artificial Antigen Presenting Cells.PLoS ONE; 8(5):e64138

8. Homann S, Hofmann C, Gorin AM, Nguyen HCX, Huynh D, Hamid P, ... & Roy SS. (2017) A novel rapid and reproducible flow cytometric method for optimization of transfection efficiency in cells. PloS one, 12(9), e0182941. (Quantum MESF to confirm and quantitate transfection efficiency featuring a fluorescently-labeled vector)

Quantum™ Simply Cellular^®

Quantum™ Simply Cellular^® (QSC) キットは、直径が 約7 ～ 9 µm の 5 つのマイクロスフェア集団で構成されています。 コーティングされた各集団は、その抗体結合容量 (ABC) 値に等しい、指定された種の特定の数のモノクローナル抗体に結合します。 研究者は、細胞の染色に使用されるのと同じ抗体を使用して、QSC ビーズにラベルを付けます。 各キットには無料の QuickCal^® 分析テンプレートが付属しており、細胞の発現レベルの測定や、機器の直線性と検出閾値の評価に役立ちます。 Quantum™ Simply Cellular^® キットには、A (20 テスト)、B (100 テスト)、および C (280 テスト) の 3 つのサイズがあります。 これらの製品の使用に関する追加情報については、抗体滴定に関する製品データシートを参照するか、PDS 818、バングス社のヒントとトラブルシューティングを確認してください。

論文

1. Bringeland, G. H., Bader, L., Blaser, N., Budzinski, L., Schulz, A. R., Mei, H. E., ... & Gavasso, S. (2019). Optimization of receptor occupancy assays in mass cytometry: Standardization across channels with QSC beads. Cytometry Part A, 95(3), 314-322.

2. Randlev B, Huang L-C, Watatsu M, Marcus M, Lin A, Shih S-J. (2010) Validation of a quantitative flow cytometer assay for monitoring HER-2/neu expression level in cell-based cancer immunotherapy products. Biologicals; 38(2):249-259.

3. McBean RS, Wilson B, Liew Y-W, Hyland CA, Flower RL. (2015) Quantitation of Lan antigen in Lan+, Lan+(w) and Lan- phenotypes. Blood Transfus; 13:662-5

4. Phillips A, Boghaert E, Vaidya K, Mitten M, Norvell S, Falls H, …Reilly A (2016) ABT-414, an Antibody Drug Conjugate Targeting a Tumor-Selective EGFR Epitope Mol Cancer Ther 15(4)661-669

5. Tillotson B, Cho YK, Shusta E, (2013) Cells and Cell Lysates: A Direct Approach for Engineering Antibodies Against Membrane Proteins Using Yeast Surface Display Methods 60(1)27-37

Simply Cellular^®

当社の Simply Cellular^® 標準は、既知の抗体結合容量 (ABC) の抗体でコーティングされたマイクロスフェア (直径約 7 ～ 9 μm) の単一集団で構成されています。 集団はユーザーの一次抗体で着色され、適切な Quantum™ MESF キットと組み合わせて使用され、抗体の有効なフルオロフォア : タンパク質 (F/P) 比を決定します。 この標準は、異なる抗体ロットまたはクローンの蛍光強度の QC にも使用できます。 Simply Cellular^® キットには、A (20 テスト)、B (100 テスト)、および C (280 テスト) の 3 つの容量があります。

論文
Andreev J, Thambi N, Perez Bay AE, Delfino F, Martin J, Kelly M… Thurston G. (2017) Bispecific Antibodies and Antibody Drug Conjugates (ADCs) Bridging HER2 and Prolactin Receptor Improve Efficacy of HER2 ADCs. Mol Cancer Ther. (16)(4) 681-693 (Quantum MESF PE [quantitation] & Simply Cellular [F:P ratio])>

Simply Cellular^® anti-Mouse for Violet Laser

Simply Cellular^® anti-Mouse for Violet Laser Standardは、バイオレット励起で低い自家蛍光を示す独自のマトリックスで構成されるマイクスフェアを特徴としています。 ビーズは、紫色蛍光色素を結合させたマウス mAb で標識するのに適しており、紫色レーザーから離れた検出器の補正または一般参照標準として使用するのに適しています。 ビーズは、他の蛍光色素/検出器との使用にも適しています。 488nm、633nm。 Simply Cellular^® anti-Mouse for Violet Laser Standardは、 2 つの集団として提供され、 1 つのブランクと 1 つの高結合抗マウス IgG (Fc 特異的) 集団で、それぞれが ProClin^® を含む水性懸濁液で提供されます。

Time Delay Calibration Standard

バングス社 の Time Delay Calibration Standard は、青色レーザーと赤色レーザーの間の遅延を評価する際に使用することを目的としています。 これは、488nm または 635nm 励起で励起され、赤色/遠赤色発光を示すフルオロフォアで着色された ～6µm のマイクロスフェアを特徴としています。

Size Calibration Standards Kit

当社のフローサイトメトリー用サイズ キャリブレーション スタンダード キットは、約 4 ～ 11 μm の範囲の未染色マイクロスフェアの 5 つの集団で構成されています。 前方散乱チャネル (FSC) 値を、報告されたビーズの直径に対してプロットして、同じ機器設定で実行される細胞のサイズの推定に使用できる曲線を生成できます。 サイズ キャリブレーション スタンダード キットには、B (100 テスト) と C (280 テスト) の 2 つのサイズがあります。

Small Bead Calibration Kits

エキソソームおよびマイクロベシクル分析への関心は、疾患状態、がんの進行、および創薬と送達を調査するための別の方法として、近年急速に高まっています。 ただし、サイズが小さいため (30 ～ 100 nm)、これらの粒子は従来の方法では検出が難しく、生物学的サンプルに一般的に見られる破片から分離または特徴付けるために追加の処理が必要です。 フローサイトメトリーは、微粒子の特徴付けのための分析および選別の一般的な方法として登場しました。

論文

1. Kong, F, Zhang, L, Wang, H, Yuan, G, Guo, A, Li, Q, & Chen, Z. (2015). Impact of collection, isolation and storage methodology of circulating microvesicles on flow cytometric analysis. Experimental and Therapeutic Medicine, 10, 2093-2101.

2. Huang S, Hou HW, Kanias T, et al. Towards microfluidic-based depletion of stiff and fragile human red cells that accumulate during blood storage. Lab on a chip. 2015;15(2):448

3. Ostergaard E, Frandsen PL, Sandberg E, (2015) Determination of freeze damage on HPV vaccines by use of flow cytometry. Biologicals Vol. 43,4:266-273

4. Venable AS, Williams RR, Haviland DL, McFarlin BK (2014) An analysis of endothelial microparticles as a function of cell surface antibodies and centrifugation techniques. J Immunol Methods, Vol406,117-123

5. Fischer S, Cornils K, Speiseder T, Badbaran A, Reimer R, Indenbirken, D, ... & Lange, C. (2016). Indication of horizontal DNA gene transfer by extracellular vesicles. PLoS One, 11(9), e0163665.(Cat. 832, 833, Submicron & Micron Bead Calibration Kits; Cat. CC03N, SureCount 3µm)

バリデーション用標準粒子

Flow Cytometry Absolute Count Standard

当社の Flow Cytometry Absolute Count Standard™ は、フローサイトメトリーを介して非標識細胞の個数を推定するために正確にカウントされたマイクロスフェアの集団です。 マイクロスフェアの直径は約 7 ～ 9 µm で、約 1e+6 ビーズ/mL で提供されます。 ビーズは、一般的なレーザー (488nm、633nm など) による励起と細胞集団からの識別のために、複数の蛍光体で内部的に標識されています。 マイクロスフェア対細胞の比率を評価することにより、細胞の体積数を決定することができます。

論文

Heinrich LF, Andersen DK, Cleasby ME, & Lawson C. (2015). Long-term high fat feeding of rats results in increased numbers of circulating microvesicles with pro-inflammatory effects on endothelial cells. British Journal of Nutrition, 113(11), 1704-1711.

QuantumPlex™

バングス社の QuantumPlex™ キットは、標準的なフローサイトメーターでマルチプレックス アッセイを開発するための一般的なプラットフォームを提供します。 5 ビーズ キットのマイクロスフェア集団は、様々な強度の Starfire Red™ でエンコードされており、2 つのサイズのキット (4.4 μm、5.5 μm) を組み合わせてアレイを拡張することができます。 Starfire Red™ は赤色チャネル (PE-Cy™5、APC など) で発光し、低波長へのキャリーオーバーはほとんどないため、FITC や PE などの一般的なレポーターを介した陽性結合イベントの決定に他の検出器を利用できます。
QuantumPlex™ キットは、選択したコーティング計画に対応するために、カルボキシル (COOH) とストレプトアビジン (SA) の 2 つの異なる表面で利用できます。 カルボキシル集団の濃度は約 1x108 ビーズ/mL ですが、ストレプトアビジンの濃度は約 1x106 ビーズ/mL です。 QuantumPlex™ には、A (1mL)、B (5mL)、C (10mL) の 3 つのサイズがあります。

論文

1. Moss DM, Montgomery JM, Newland SV, Priest JW, Lammie PJ. (2004) Detection of cryptosporidium antibodies in sera and oral fluids using multiplex bead assay. J Parasitol; 90(2):397-404. [QuantumPlex COOH]

2. Yu J, Carvalho Mda G, Beall B, Nahm MH. (2008) A rapid pneumococcal serotyping system based on monoclonal antibodies and PCR. J Med Microbiol; 57(Pt 2):171-8. [QuantumPlex COOH]

3. Kellar, KL, Iannone, M (2002) Multiplexed microsphere-based flow cytometric assays. Exp. Hematol , V30, 11,p 1227-1237

4. Hale M, Lee B, Honaker Y, Leung W, Grier A, Jacobs H…Rawlings D. (2017) Homology-Directed Recombination for Enhanced Engineering of Chimeric Antigen Receptor T Cells. Mol Ther Methods Clin Dev; Vol 4 p192-203

5. Kellar KL, Mahmutovic AJ, Bandyopadhyay K. (2006) Multiplexed microsphere-based flow cytometric immunoassays. Curr Protoc Cytom. Feb;Chapter 13:Unit13.1.

6. Dolgushin SA, Odintsova ES, Gerasimenko AY, Tronin AV, Tereshchenko SA.(2015) Preliminary Tests of Multiplex Immunoassay for Detection of TORCH Infections in Human Blood Serum Using Flow Cytometry. Biomed Eng. Vol 49, 2,85-89

7. Spiro A, Lowe M, Brown D.(2000)A Bead-Based Method for Multiplexed Identification and Quantitation of DNA Sequences Using Flow Cytometry. Appl. Environ. Microbiol. Vol 66(10)p4258-4265

QuantumPlex™ SP

QuantumPlex™ SP (Single Population) は、シンプレックス フローサイトメトリー アッセイの開発、またはマルチプレックス形式に移行する前のattachment chemistry およびアッセイ パラメータの最適化に役立ちます。 QuantumPlex™ と同様に、Starfire Red™ で染色されており、標準的なフローサイトメーターでの使用に適しています。 カルボキシル (COOH) およびストレプトアビジン表面が利用可能です。 カルボキシル 集団は ~1x108 ビーズ/mL の濃度で、ストレプトアビジン 集団は ~1x106 ビーズ/mL の濃度です。 QuantumPlex™ SP には、A (1mL) または B (3mL) の 2 つのサイズがあります。

QuantumPlex™M

QuantumPlex™M (Magnetic) キットは、さまざまな強度の Starfire Red™ でエンコードされた非常に均一な ~6µm の超常磁性マイクロスフェアの 5 つの集団で構成されています。 QuantumPlex™ と同様に、標準的なフローサイトメーターでの使用に適しています。 希土類磁気分離器(Rare earth magnetic separators)を使用すると、非常に効率的な分離を行うことができます。 カルボキシル (COOH) およびストレプトアビジン表面が利用可能です。 カルボキシル 集団は ~1x108 ビーズ/mL の濃度で、ストレプトアビジン 集団は ~1x106 ビーズ/mL の濃度です。 QuantumPlex™M には、A (1mL)、B (5mL)、C (10mL) の 3 つのサイズがあります。

論文

1. Yang S, Lien K, Huang K, Lei H, Lee G. (2008) Micro flow cytometry utilizing a magnetic bead-based immunoassay for rapid virus detection. Biosens. Bioelectron Vol 24:4 855-862 (QuantumPlex M Streptavidin)

2. Joslin J, Gilligan J, Anderson P, Garcia C, Sharif O, Hampton J … Lesley S (2018) A Fully Automated High-Throughput Flow Cytometry Screening System Enabling Phenotypic Drug Discovery. 05/29 SLAS DISC: Adv Life Sci R&D (QuantumPlex M COOH)

QuantumPlex™M SP

QuantumPlex™M SP (Magnetic, Single Population) は、シンプレックス フローサイトメトリー アッセイの開発、またはマルチプレックス形式に移行する前のattachment chemistry およびアッセイ パラメータの最適化に役立ちます。 QuantumPlex™M と同様に、これらは Starfire Red™ で着色された非常に均一な ~6µm の超常磁性マイクロスフェアであり、標準的なフローサイトメーターでの使用に適しています。 カルボキシル (COOH) およびストレプトアビジン表面が利用可能です。 カルボキシル集団の濃度は約 1x108 ビーズ/mL ですが、ストレプトアビジンの濃度は約 1x106 ビーズ/mL です。 QuantumPlex™M SP には、A (1mL) または B (3mL) の 2 つのサイズがあります。

フローサイトメトリー　データ解析

QuickCal^®

Bangs Laboratories QuickCal^® アクセス番号は、Quantum™ MESF または Quantum™ Simply Cellular^® ビーズ キットの瓶に貼られたラベルに印刷されています。 QuickCal アクセス番号を提供すると、購入した特定のビーズ ロットに適したファイルを見つけることができます。 QuickCal アクセス番号がないと、QuickCal^® にアクセスできません。 ご利用するには、バングス社のサイトにアクセスしてください。